骨髓祖細(xì)胞中NEK2的高表達(dá)抑制多發(fā)性骨髓瘤患者的T細(xì)胞免疫

       多發(fā)性骨髓瘤（MM）的生長(zhǎng)是由免疫耐受骨髓微環(huán)境支持的。在這里，作者發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境細(xì)胞中有絲分裂基因A（NIMA）相關(guān)激酶2（NEK2）中Never的缺失與MM生長(zhǎng)抑制有關(guān)。NEK2的缺失導(dǎo)致腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞（TAMs）和抑制性T細(xì)胞的減少。髓系祖細(xì)胞中NEK2的表達(dá)在MM條件培養(yǎng)基刺激下促進(jìn)功能性TAMs的產(chǎn)生。在臨床上，MM細(xì)胞中NEK2的高表達(dá)與CD8⁺ T效應(yīng)記憶細(xì)胞的增加有關(guān)，而NEK2的低表達(dá)與IFN-γ基因標(biāo)記和激活的T細(xì)胞反應(yīng)有關(guān)。抑制NEK2可上調(diào)MM細(xì)胞和髓細(xì)胞中PD-L1的表達(dá)。在小鼠模型中，NEK2抑制劑INH154與PD-L1抑制劑聯(lián)合使用可有效消除MM細(xì)胞并延長(zhǎng)生存期。作者的研究結(jié)果提供了強(qiáng)有力的證據(jù)，證明NEK2抑制可以克服腫瘤免疫逃逸，并支持其進(jìn)一步的臨床開(kāi)發(fā)。本文于2023.10發(fā)表于《Cell Reports Medicine》，IF:14.3;Q1。

技術(shù)路線

研究機(jī)制圖

主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、敲除NEK2可提高Eμ-myc小鼠的存活率并誘導(dǎo)T細(xì)胞活化

       NEK2在B細(xì)胞譜系中的過(guò)表達(dá)影響B(tài)細(xì)胞的發(fā)育。為了確定NEK2缺乏是否會(huì)抑制B細(xì)胞惡性腫瘤，作者生成了NEK2^-/-小鼠。接下來(lái)，作者將NEK2^-/-小鼠與Eμ-myc轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，Eμ-myc轉(zhuǎn)基因小鼠是一種成熟的Myc驅(qū)動(dòng)的B細(xì)胞惡性嬰兒臨床前模型。Eμ-myc/Nek2^+/+和Eμ-myc/Nek2^+/-小鼠的存活率相似（圖1A）。然而，Eμ-myc/NEK2^+/-小鼠的存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)（圖1A），這表明NEK2的兩個(gè)等位基因的缺失延遲了B細(xì)胞淋巴瘤的進(jìn)展。為了研究這些小鼠B細(xì)胞腫瘤發(fā)展的早期階段，作者在小鼠6-8周齡時(shí)采集了血液、骨髓和脾臟樣本。全血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析顯示，與Eμ-myc/Nek2^+/+小鼠相比，Eμ-myc/Nek2^-/-小鼠的循環(huán)延遲淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，血小板增加（圖1B）。脾臟和胸腺的重量也有所下降（圖1C）。BM和脾臟B細(xì)胞亞群的流量測(cè)定進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，與Nek2^+/+小鼠相比，Eμ-myc/Nek2^+/+小鼠的pre-B細(xì)胞和pro-B細(xì)胞增加，但成熟B細(xì)胞減少，而Eμ-myc/Nek2^-/-小鼠的pre-B細(xì)胞和pro-B細(xì)胞減少，但成熟B細(xì)胞的損失不太明顯（圖1D）。因此，NEK2的缺失限制了Myc誘導(dǎo)的淋巴瘤發(fā)生。

       為了比較Eμ-myc/Nek2^-/-小鼠與Eμ-myc/Nek2^+/+小鼠的轉(zhuǎn)錄組特征，作者收集了癌前B細(xì)胞并進(jìn)行了RNA測(cè)序（圖1E）。有趣的是，免疫相關(guān)通路顯著上調(diào)（圖1F），強(qiáng)烈提示缺乏NEK2與免疫激活有關(guān)。Cxcl9在抗腫瘤免疫中起關(guān)鍵作用，依賴(lài)于IFN-γ的產(chǎn)生，折疊變化最大（log2FC = 10.5）。一些抑制性免疫受體也上調(diào)，包括Cd274（編碼PD-L1）。為了驗(yàn)證PD-L1的上調(diào)是否由于IFN-γ的激活，作者分析了小鼠B細(xì)胞中IFN-γ信號(hào)的下游靶點(diǎn)。與Eμ-myc/Nek2^+/+小鼠相比，Eμ-myc/Nek2^-/-小鼠中JAK/STAT1/IRF1信號(hào)顯著激活（圖1G和1H）。最后，為了確定荷瘤和非荷瘤小鼠Nek2^+/+和Nek2^-/-的T細(xì)胞激活狀態(tài)，作者進(jìn)行了流式細(xì)胞術(shù)。與無(wú)腫瘤小鼠相比，Eμ-myc/Nek2^+/+小鼠的CD8⁺原始T細(xì)胞（T_N）受到抑制，但Eμ-myc/Nek2^-/-小鼠未觀察到這種損失（圖1I）。另一方面，CD8⁺T_EM顯示相反的情況（圖1I）。而PD1在T細(xì)胞上的表達(dá)無(wú)明顯變化。這些數(shù)據(jù)表明，在NEK2敲除的Eμ-myc小鼠中，T細(xì)胞反應(yīng)較少被驅(qū)動(dòng)為效應(yīng)記憶表型，并且存在針對(duì)Myc誘導(dǎo)的B細(xì)胞惡性腫瘤的改善的T細(xì)胞免疫反應(yīng)。

圖1 敲除NEK2可提高Em-myc小鼠的存活率并誘導(dǎo)T細(xì)胞活化

2、NEK2缺失可減少腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和Tregs

       為了確定腫瘤微環(huán)境細(xì)胞中NEK2的缺乏如何促進(jìn)腫瘤抑制和免疫調(diào)節(jié)，作者測(cè)試了NEK2^-/-小鼠中5TGM1 MM細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，并將其與NEK2^+/+窩鼠進(jìn)行了比較（圖2A）。在Nek2^-/-小鼠中接種5TGM1 MM細(xì)胞可降低血清IgG2b水平，延長(zhǎng)存活時(shí)間（圖2B和2C）。采用單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA-seq）技術(shù)研究BM細(xì)胞的細(xì)胞多樣性和轉(zhuǎn)錄組。使用標(biāo)準(zhǔn)數(shù)量控制，作者共分析了30284個(gè)BM細(xì)胞。將細(xì)胞投射到二維均勻流形近似和投影（UMAP）圖上，作者發(fā)現(xiàn)了17個(gè)不同的細(xì)胞簇（圖2D）。5TGM1 MM細(xì)胞通過(guò)高表達(dá)Sdc1（編碼CD138）被鑒定，并且只出現(xiàn)在5TGM1注射小鼠中。通過(guò)小鼠血清IgG2b水平測(cè)量，scRNA-seq顯示5TGM1/Nek2^-/-組（40%）與5TGM1/Nek2^+/+組（60%）相比，BM中MM細(xì)胞的百分比較低（圖2D）。在5TGM1 MM細(xì)胞注射小鼠中，正常漿細(xì)胞和pro-B細(xì)胞簇顯著減少，表明MM存在正常B細(xì)胞發(fā)育缺陷。這與最近的一篇報(bào)道一致，MM患者顯示正常漿細(xì)胞百分比降低。骨髓細(xì)胞是骨髓中最豐富的免疫細(xì)胞。與Nek2^+/+小鼠相比，荷瘤Nek2^+/+小鼠的巨噬細(xì)胞簇增加了3.6倍。

       一個(gè)有趣的發(fā)現(xiàn)是，除了MM細(xì)胞和pro-B細(xì)胞外，NEK2在骨髓細(xì)胞和單細(xì)胞簇中表達(dá)最豐富（圖2E）。為了鑒定巨噬細(xì)胞集群中5TGM1/Nek2^+/+和5TGM1/Nek2^-/-組之間的差異表達(dá)基因，共鑒定出56個(gè)上調(diào)基因和43個(gè)下調(diào)基因（圖2F）。KEGG通路分析顯示，5TGM1/Nek2^-/-巨噬細(xì)胞中的鐵凋亡、破骨細(xì)胞分化和細(xì)胞周期減少（圖2G）。作者觀察到，與5TGM1/Nek2^+/+小鼠相比，5TGM1/Nek2^-/-小鼠的微計(jì)算機(jī)斷層掃描（μCT）顯示骨病變減少（圖2H），TRAP染色顯示5TGM1/Nek2^-/-小鼠的脛骨破骨細(xì)胞數(shù)量減少（圖2I）。5TGM1/Nek2^-/-巨噬細(xì)胞在抗原進(jìn)程和呈遞、Fc γ R介導(dǎo)的吞噬、NOD樣受體信號(hào)通路和趨化因子信號(hào)通路中表現(xiàn)出陽(yáng)性富集（圖2J）。為了進(jìn)一步分析各組間巨噬細(xì)胞的表型差異，根據(jù)高可變基因的表達(dá)，共將740個(gè)巨噬細(xì)胞投影到UMAP圖上，并鑒定出四個(gè)巨噬細(xì)胞亞群（圖2K）。M-1亞群（Cirbp、Nfil3、Mt1、Apoe）、M-2亞群（CD36、Bcl2a1b）、M-3亞群（S100a9、S100a8、Lcn2）主要出現(xiàn)在荷瘤組，而這些基因在5TGM1/Nek2^-/-組中被抑制，其特征是被免疫抑制（Apoe、S100a9、S100a8）、巨噬細(xì)胞失活（Lcn2）、抗凋亡（Bcl2a1b）相關(guān)基因所控制（圖1K）。以抗原呈遞（Cd74）、巨噬細(xì)胞活化（Adgre4、Adgre5）和化療趨向性（Ccr2、Csf1r、Cx3cr1）相關(guān)基因?yàn)樘卣鞯腗-0（Cd74、Ace、Adgre4）亞群在所有組中保持不變（圖2K）。NK/T細(xì)胞群比較（共627個(gè)細(xì)胞）顯示T-1（CD4, Foxp3, Ctla4）亞群顯著增加，其特征是與衰竭相關(guān)的基因（Foxp3, Ctla4）和T細(xì)胞激活標(biāo)志物（CD27, Gzmk, Gzma）的缺失（圖2L），表明T調(diào)節(jié)細(xì)胞（Tregs）在5TGM1/Nek2^+/+組中增加。作者得出結(jié)論，抑制NEK2可以減少TAMs和Tregs的積累。

圖2 NEK2的缺失會(huì)降低腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)和Tregs

3、NEK2缺乏降低了TAMs和MDSCs的免疫抑制活性

       為了證實(shí)作者的scRNA-seq發(fā)現(xiàn)，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)定量了小鼠BM和脾臟的免疫細(xì)胞群（圖3A、3B、S3A和S3B）。與5TGM1/Nek2^+/+小鼠相比，作者觀察到5TGM1/Nek2^-/-小鼠BM和脾臟中注射5TGM1 MM細(xì)胞的異常漿細(xì)胞（aPCs, CD19 ^- CD138⁺）受到抑制（圖3A）。與5TGM1/Nek2^+/+小鼠相比，5TGM1/Nek2^-/-小鼠脾臟中Ly6C^hi巨噬細(xì)胞（CD11b⁺ CD11c ^- F4/80⁺ Ly6C^hi）、MoMDSCs（CD11b⁺ CD11c ^- F4/80 ^- Ly6C^hiLy6G ^-）和G-MDSCs（CD11b⁺ CD11c ^- F4/80 ^- Ly6C^intLy6G⁺）減少（圖3A）。然而，在骨髓中沒(méi)有觀察到這些發(fā)現(xiàn)，因?yàn)樵夹∈蠊撬杩赡芎写罅康恼９撬杓?xì)胞，這些細(xì)胞在表型上與MDSCs無(wú)法區(qū)分。對(duì)于T細(xì)胞群，雖然在總T細(xì)胞中沒(méi)有觀察到明顯的變化，但與5TGM1/Nek2^-/-小鼠相比，5TGM1/Nek2^+/+小鼠的BM中CD4/CD8細(xì)胞比例增加（圖3B）。正如預(yù)期的那樣，與5TGM1/Nek2^-/-小鼠相比，CD4和CD8 T細(xì)胞在5TGM1/Nek2^+/+中PD-1的表達(dá)均增加，這表明T細(xì)胞具有更強(qiáng)的抑制性（圖3B）。與非5TGM1注射組相比，荷瘤組IFN-γ⁺或顆粒酶B⁺ CD8 T細(xì)胞的百分比均無(wú)顯著增加，但Nek2^+/+和Nek2^-/-之間的差異很小或沒(méi)有（圖3B）。這些發(fā)現(xiàn)表明，微環(huán)境細(xì)胞中缺乏NEK2傾向于抑制功能性TAMs和MDSCs的產(chǎn)生，并減少抑制性T細(xì)胞群。

       鑒于TAMs和MDSCs可以通過(guò)細(xì)胞因子從原始BM細(xì)胞誘導(dǎo)，作者首先在體外測(cè)試了NEK2對(duì)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的TAMs和MDSCs生成的影響（圖3C）。5TGM1條件培養(yǎng)基（CM）提高了Nek2^+/+小鼠來(lái)源的巨噬細(xì)胞的細(xì)胞存活率，而Nek2^-/-的巨噬細(xì)胞存活率較低（圖3D）。已知NEK2調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂。作者在巨噬細(xì)胞的細(xì)胞周期中觀察到類(lèi)似的結(jié)果;即5TGM1 CM處理的Nek2^+/+巨噬細(xì)胞與5TGM1 CM處理的Nek2^-/-巨噬細(xì)胞相比，具有更高的S和G2/M群（圖3E）。與未處理的巨噬細(xì)胞相比，5TGM1 CM促進(jìn)了CD206的表達(dá)，而NEK2缺乏則降低了CD206的表達(dá)（圖3F），表明NEK2促進(jìn)了TAMs的分化。此外，與Nek2^+/+小鼠誘導(dǎo)的TAMs相比，由Nek2^-/-小鼠誘導(dǎo)的TAMs促進(jìn)了T細(xì)胞增殖和IFN-γ的產(chǎn)生（圖3G）。作者假設(shè)NEK2在響應(yīng)腫瘤分泌因子時(shí)影響TAMs的激活。5TGM1 MM細(xì)胞與漿細(xì)胞差異表達(dá)基因的scRNA-seq分析顯示Mif和Hmgb1在MM細(xì)胞中高表達(dá)（圖3H）。為了研究NEK2是否能促進(jìn)宏觀噬菌體對(duì)MIF-PI3K-AKT30和HMGB1-STAT3信號(hào)的反應(yīng)，作者進(jìn)行了western blot，結(jié)果顯示，與未刺激的相關(guān)巨噬細(xì)胞相比，NEK2 ^+/+ TAMs中p110α、p110γ、PI3K III類(lèi)、p-AKT（S473）和p-STAT3 （Y705）水平升高，而這些水平在NEK2^-/-TAMs中被阻斷（圖3I）。Nek2^+/+和Nek2^-/-小鼠的MDSCs中也觀察到類(lèi)似的結(jié)果（圖3J - 3L）。這些發(fā)現(xiàn)表明NEK2增強(qiáng)了TAMs和MDSCs的免疫抑制功能。

圖3 NEK2缺乏降低了TAMs和MDSCs的免疫抑制活性

4、NEK2高表達(dá)的MM患者表現(xiàn)出T細(xì)胞反應(yīng)受損

       作者研究了來(lái)自堪薩斯大學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)（UAMS）檔案（UAMS- MM）的324個(gè)MGUS、303個(gè)SMM、1049個(gè)NDMM和1066個(gè)RRMM的BM衍生的CD138選擇漿細(xì)胞中NEK2基因的表達(dá)模式。與SMM和MGUS相比，NDMM中的NEK2 mRNA水平升高（圖4A），RRMM中的NEK2 mRNA水平相對(duì)于NDMM進(jìn)一步升高（圖4A）。此外，與GEP70評(píng)分定義的低風(fēng)險(xiǎn)（LR）MM相比，HR MM中的NEK2更高（圖4A）。根據(jù)基因表達(dá)模式，MM可分為7個(gè)分子亞型，其中NEK2在增殖（PR）亞型中表達(dá)最高，在超二倍體（HY）亞型中表達(dá)最低（圖4B）。在多發(fā)性骨髓瘤研究基金會(huì)（MMRF）的CoMMpass數(shù)據(jù)集中，包括606個(gè)NDMM樣本，證實(shí)了不同MM亞型的NEK2差異（圖4B）。對(duì)UAMS-MM和MMRF CoMMpass數(shù)據(jù)的Kaplan-Meier分析顯示，NEK2高表達(dá)的MM患者總生存期（OS）和無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）較差（圖4C）。

       為了確定NEK2表達(dá)水平與免疫效應(yīng)細(xì)胞的相關(guān)性，作者使用免疫細(xì)胞面板進(jìn)行了細(xì)胞計(jì)數(shù)（CyTOF）。根據(jù)NEK2在CD138選擇的漿細(xì)胞中的表達(dá)情況，將BM抽吸樣品分為NEK2^high組（n = 6）和NEK2^low組（n = 6）。為了分析免疫細(xì)胞亞型和免疫檢查點(diǎn)表達(dá)，作者對(duì)門(mén)控CD45⁺細(xì)胞進(jìn)行了FlowSOM分析。由于T細(xì)胞是MM患者中最豐富的細(xì)胞群，并且已報(bào)道與患者預(yù)后相關(guān)，作者進(jìn)一步分析了T細(xì)胞亞群和T細(xì)胞激活狀態(tài)。結(jié)果顯示，大多數(shù)T細(xì)胞處于終末活化狀態(tài)。其中，T_EM和T_EMRA細(xì)胞在CD8⁺ T細(xì)胞中最多，而T_EM和T_CM （T central memory）細(xì)胞在CD4⁺ T細(xì)胞中最多;CD4⁺和CD8⁺ T細(xì)胞中T_N的表達(dá)最少（圖4D）。NEK2^low組CD8⁺ T_EM細(xì)胞減少（圖4D）。此外，PD1⁺ CD8⁺ T細(xì)胞的百分比與NEK2表達(dá)顯著相關(guān)（圖4E和4F）。在NEK2高表達(dá)的MM樣品中觀察到CD8⁺ T細(xì)胞增殖能力降低（圖4G）。此外，CD8⁺ T細(xì)胞產(chǎn)生IFNγ與NEK2表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，但未觀察到TNFα和IL-6的變化（圖4H）。這些結(jié)果表明NEK2是MM的預(yù)后標(biāo)志物，腫瘤細(xì)胞中高NEK2與T細(xì)胞功能受損有關(guān)。

圖4 NEK2高表達(dá)的MM患者表現(xiàn)出T細(xì)胞反應(yīng)受損

5、NEK2抑制MM患者的IFN-γ/PD-L1信號(hào)通路

       作者觀察到IFN-γ基因特征與CIN基因特征之間呈負(fù)相關(guān)（圖5A）。與作者的動(dòng)物研究一致（圖1G），作者還觀察到，在UAMS-MM和MMRF CoMMpass數(shù)據(jù)集中，IFN-γ誘導(dǎo)基因CD274與NDMM樣品中的NEK2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（圖5B）。CD274在HY亞型中表達(dá)最高，在PR亞型中表達(dá)最低（圖5C），這與其他研究一致，基于流式細(xì)胞檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示PD-L1在超二倍體患者中增加。為了確定NEK2和CD274聯(lián)合表達(dá)是否能更好地預(yù)測(cè)患者預(yù)后，作者將患者分為四組，NEK2^highCD274^high、NEK2^highCD274^low、NEK2^lowCD274^high和NEK2^lowCD274^low。Kaplan-Meier分析顯示NEK2^lowCD274^high患者的OS和PFS最佳（圖5D）。為了驗(yàn)證NEK2和PD-L1表達(dá)在蛋白水平上的相關(guān)性，作者對(duì)50例NDMM活檢樣本進(jìn)行了NEK2和PD-L1的免疫組織化學(xué)（IHC）分析。繪制PD L1陽(yáng)性與NEK2陽(yáng)性細(xì)胞的百分比顯示，NEK2和PD- L1的蛋白水平呈負(fù)相關(guān)（圖5E）。這些結(jié)果表明，IFN-γ/PD-L1信號(hào)軸在高NEK2的MM細(xì)胞中受到壓迫。

圖5 NEK2抑制MM患者的IFN-g/PD-L1信號(hào)通路

6、NEK2抑制與抗PD - L1單抗聯(lián)合治療可提供治療益處

       基于NEK2抑制損害TAMs和MDSCs功能，同時(shí)上調(diào)MM細(xì)胞中PD-L1表達(dá)的發(fā)現(xiàn)，作者假設(shè)NEK2抑制劑INH154與抗PD-L1單抗聯(lián)合使用將具有額外的治療益處。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，作者對(duì)BM-MNCs進(jìn)行了體外處理（圖6A）。INH154處理顯著降低了CD138⁺ MM細(xì)胞的百分比（圖6B），提示INH154選擇性靶向MM細(xì)胞可能是由于其相對(duì)較高的增殖能力。PD-L1單抗對(duì)MM細(xì)胞沒(méi)有明顯的殺傷作用，這可能是由于抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用有限。PD-L1單抗可有效阻斷INH154處理后MM細(xì)胞和髓細(xì)胞中PD-L1表達(dá)的增加（圖6C和6D）。此外，INH154和聯(lián)合治療后，總T細(xì)胞增加，而CD8⁺和CD4⁺ T細(xì)胞占總T細(xì)胞的百分比無(wú)明顯變化（圖6E）。此外，在INH154和聯(lián)合治療后，PD1⁺ CD8⁺和CD4⁺ T細(xì)胞的百分比均下降（圖6F）。這些數(shù)據(jù)表明，NEK2阻斷選擇性地抑制原發(fā)性骨髓瘤樣本中MM細(xì)胞的生長(zhǎng)并減少PD1⁺ T細(xì)胞，并且通過(guò)阻斷MM和單核細(xì)胞上的PD-L1表達(dá)（NEK2抑制后PD-L1表達(dá)增加），與PD-L1單抗聯(lián)合使用可提供更好的治療效果。

圖6 NEK2抑制可提高抗pd - l1單克隆抗體(mAb)抗MM的效力

       為了測(cè)試聯(lián)合治療對(duì)well-es-建立的臨床前V_k*MYC MM小鼠模型的療效，在V_k12653 MM細(xì)胞注射前1天單獨(dú)或聯(lián)合給藥INH154和PD-L1 mAb，隨后每周兩次給藥，持續(xù)5周（圖7A）。單獨(dú)治療時(shí)，IHN154和PD-L1單抗均可降低V_k12653 MM細(xì)胞注射后第35天的血清γ-球蛋白水平，聯(lián)合治療時(shí)觀察到進(jìn)一步降低（圖7B）。此外，Kaplan-Meier生存分析顯示，聯(lián)合治療組的生存期顯著延長(zhǎng)（圖7C）。INH154和PD-L1單抗處理小鼠的脾臟重量均較低，聯(lián)合治療進(jìn)一步降低（圖7D）。流式細(xì)胞術(shù)分析BM和脾臟中CD138⁺ B220 ^- MM細(xì)胞百分比及其PD-L1表達(dá)水平顯示，聯(lián)合治療組MM細(xì)胞百分比顯著降低（圖7E、7F）。此外，在INH154處理后，MM細(xì)胞上PD-L1的表達(dá)略有增加，而在PD-L1單抗處理后，PD-L1的表達(dá)幾乎完全被阻斷（圖7E、7F）。這些數(shù)據(jù)表明抑制劑INH154中的NEK2通過(guò)提高PD-L1水平和增強(qiáng)CD8⁺ T細(xì)胞活性，顯著增強(qiáng)抗PD-L1單抗的抗腫瘤功效。

圖7 聯(lián)合NEK2抑制與抗pd - l1單抗治療在MM小鼠模型中提供治療效果

結(jié)論

       研究強(qiáng)烈表明，在環(huán)境中阻斷NEK2可以通過(guò)增強(qiáng)抗腫瘤免疫來(lái)延緩MM腫瘤的進(jìn)展。具體來(lái)說(shuō)，髓系祖細(xì)胞中NEK2的缺乏減少了功能性TAMs和MDSCs的產(chǎn)生，從而增強(qiáng)了T細(xì)胞的抗腫瘤功能。通過(guò)評(píng)估NEK2在MM免疫中的臨床意義發(fā)現(xiàn)較高的NEK2表達(dá)與CD8⁺ T_EM細(xì)胞頻率增加有關(guān)，而較低水平的NEK2富集與PD-L1表達(dá)升高相關(guān)的IFN-γ基因特征。NEK2抑制劑INH154通過(guò)提高PD-L1水平和增強(qiáng)CD8⁺ T細(xì)胞活性，顯著增強(qiáng)抗PD-L1單抗的抗腫瘤療效。

實(shí)驗(yàn)方法

體內(nèi)治療；小鼠血清蛋白電泳；流式細(xì)胞術(shù)；Bulk RNA序列；單細(xì)胞RNA序列（scRNA-seq）；生物信息學(xué)分析；微計(jì)算機(jī)斷層掃描（μCT）；骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)；體外TAMs和MDSCs生成；T細(xì)胞與TAMs或MDSCs共培養(yǎng)的功能測(cè)定；細(xì)胞活力和細(xì)胞周期；Western Blot；人骨髓瘤細(xì)胞的分離純化；基因表達(dá)譜分析；實(shí)時(shí)定量PCT；人T細(xì)胞功能測(cè)定；免疫組化；細(xì)胞計(jì)數(shù)術(shù)（CyTOF）；原代BM-MNCs的體外處理。

參考文獻(xiàn)

Cheng Y, Sun F, Alapat DV, Wanchai V, Mery D, Guo W, Cao H, Zhu Y, Ashby C, Bauer MA, Nookaew I, Siegel ER, Ying J, Chen JR, Gai D, Peng B, Xu H, Bailey C, Al Hadidi S, Schinke C, Thanendrarajan S, Zangari M, Chesi M, Bergsagel PL, van Rhee F, Janz S, Tricot G, Shaughnessy JD Jr, Zhan F. High NEK2 expression in myeloid progenitors suppresses T cell immunity in multiple myeloma. Cell Rep Med. 2023 Oct 17;4(10):101214. doi: 10.1016/j.xcrm.2023.101214. Epub 2023 Oct 3. PMID: 37794587; PMCID: PMC10591052.